รายงานวิจัยฉบับสมบูรณ์ โครงการวิจัยการผลิตสารประกอบเตตร้าไพโรล และวิตามินบี 12 โดยวิธีทางพันธุวิศวกรรมในแบคทีเรียโพรพิโอไน (ระยะที่ 1) : การโคลนยีนกลุ่ม cbi

Abstract

เนื่องจากการสังเคราะห์วิตามินบี12โดยขบวนการทางเคมี มีขั้นตอนยุ่งยากและมีเอ็นไซม์ เกี่ยวข้องมากกว่า70 ขั้นตอน ในทางอุตสาหกรรมการผลิตวิตามินบี12 จึงทําโดยขบวนการหมักจาก จุลินทรีย์ และมีการเพิ่มประสิทธิภาพในการผลิตโดยขบวนการตัดต่อยืนต่างๆ ที่เกี่ยวข้องในการ สังเคราะห์วิตามินบี12ในแบคทีเรีย Propionibacterium freudenreichiii ซึ่งเป็นแบคทีเรียที่ผลิต วิตามินบี12 การศึกษาก่อนหน้านี้ได้มีการนํากลุ่มยืนที่เกี่ยวข้องกับการสังเคราะห์วิตามินบี12 ได้แก่ ยืนในตระกูล /hem และ cob มาศึกษา โดยสร้างพลาสมิด pKHEM06 ที่มียืนhen-4, henB และ cobA ซึ่งถอดรหัสการสร้างเอนไซม์S-Aminolevulinate synthase, ALA dehydratase และ uroporphyrinogenMl1 Imethyltransferase ตามลําดับ และพบว่าแบคทีเรีย P. fresidenreichti ที่มี พลาสมิด pKHEM06 สามารถสังเคราะห์วิตามินบี12 ได้ 1.68 mg/l เพิ่มขึ้นเป็น 2.2 เท่าเทียบกับสายพันธุ์ธรรมชาติ เพื่อ เพิ่มการสังเคราะห์วิตามินบี12ในแบคทีเรีย P. freudenreichiโดยวิธีทางพันธุวิศวกรรมให้สูงขึ้น และได้มีรายงานว่ายืนcbiL และ cbiF ที่ควบคุมการสร้างเอนไซม์ cobalt precorrin-3-synthase และ cobalt precorin-5-synthase ตามลําดับสามารถเพิ่มการผลิตวิตามินบี12 ได้ดีกว่ายืนอื่นๆ ในกลุ่มchi ในการศึกษา (ระยะที่1) นี้ จึงนํายืนcbiL และ cbiF มาใส่ในพลาสมิด pKHEM06 โดยใส่ไปหลังยืน iennB ของหลวสมิดpKHEM06 ได้เป็นพลาสมิด pKHEM08 พลาสมิดpKHEM08 มีขนาด13.0 kb และประกอบด้วยยืนhen.A henB cbiL cbiF และ cob4 พลาสมิด pKHEM08 นี้จะถูกนําไปเข้าสู่ P. freuderreichit เพื่อศึกษาปริมาณวิตามินบี12ในแบคทีเรีย P. freudenreichi ในการศึกษาในระยะที่ 2 ต่อไป